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Kamal Rai Aneja I Chetan Sharma II Radhika Joshi III I Dr (Professor) studioso II Research (Kurukshetra) III ricerca sulle infezioni studioso orecchio è una delle malattie più comuni che si verificano in tutto il mondo. Diversi agenti eziologici sono responsabili per le infezioni dell'orecchio. OBIETTIVO: Per valutare il potenziale antimicrobico delle foglie Arjuna Terminalia ed estratti di corteccia contro Staphylococcus aureus, Acinetobacter sp. Proteus mirabilis, Escherchia coli, Pseudomonas aeruginosa e Candida albicans. patogeni che causano infezioni dell'orecchio e loro confronto con gocce per le orecchie disponibili a livello locale. MATERIALI E METODI: metanolo, etanolo, acetone, acquosi (calda e fredda) estratti dalle foglie e corteccia di Arjuna T. sono stati testati per la loro attività antimicrobica. RISULTATI: Dei tre solventi organici valutati, estratto di foglie di acetonic è risultata essere migliore contro S. aureus. estratto di corteccia di organico ha mostrato quasi uguale l'inibizione di tutti i batteri Gram-negativi testati, tranne P. aeruginosa. Tuttavia, estratto acquoso di corteccia di Arjuna T. esposto buona attività contro S. aureus. Tutti gli estratti sono stati in grado di esporre qualsiasi attività antifungina. In conclusione, l'estratto organici ottenuti dalla corteccia Arjuna T. e le foglie può essere usato per trattare i patogeni batterici orecchio particolare S. aureus. che ha mostrato maggiori zone di inibizione che le gocce a base di erbe, tuttavia, abbiamo ancora bisogno di studi più dettagliati come la sperimentazione in vivo e le proprietà farmacocinetiche per la loro utilità terapeutica nel trattamento delle infezioni dell'orecchio. Parole chiave: attività antimicrobica, patogeni orecchio, impianto di infezione dell'orecchio estratto è più comune nei bambini rispetto agli adulti, circa il 75 di esperienza i bambini almeno tre o più infezioni dell'orecchio durante i primi tre anni di vita 1. infezione dell'orecchio è causata principalmente da batteri (Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, S. epidermidis, Streptococcus pneumoniae, Escherichia coli, Proteus mirabilis) e patogeni fungini (Aspergillus niger, A. fumigatus, A. flavus, Candida albicans) 2-5. L'efficacia clinica di molti agenti chemioterapici esistenti è minacciata dalla comparsa di patogeni multiresistenti. I batteri naturalmente sviluppano resistenza ai farmaci antimicrobici. Negli ultimi anni, tuttavia, l'uso eccessivo e l'abuso di antibiotici ha causato un numero crescente di batteri stafilococco ad evolversi in malattie che causano superbatteri resistenti ai farmaci come meticillina, vancomicina 6-8. La crescente fallimento di chemioterapici e resistenza agli antibiotici esposti da agenti infettivi patogeni microbici ha portato alla proiezione di diversi impianti per il loro potenziale attività antimicrobica e lo sviluppo di nuovi antimicrobici da aziende farmaceutiche 7,9. Le erbe sono in scena una rimonta e rinascimentale a base di erbe sta accadendo in tutto il mondo e secondo l'OMS, 80 dei mondi popolazione si basa su farmaci tradizionali a base di piante per la loro assistenza sanitaria primaria ha bisogno di 10-12. La natura ha donato l'India con ricca flora che è ampiamente distribuita. Erbe medicinali sono stati utilizzati per il trattamento e la cura di varie malattie nei metodi praticati tradizionali indiani come l'Ayurveda, Unani e Siddha 13,14. Terminalia Arjuna Wight Arn. comunemente chiamato Arjuna (famiglia Combretaceae), è un albero a foglie decidue e sempreverdi distribuito in tutta l'India e anche trovato in Birmania, Srilanka e Mauritius, che cresce fino ad un'altezza di 60 a 90 piedi. Foglie di Arjuna sono semplici, oblunghe o ellittiche con superficie superiore verde chiaro e scuro e pallido superficie inferiore marrone. I fiori sono bisessuali, sessili e nero disposti in brevi picchi ascellari o in pannicule terminale. La corteccia è liscia, rosa-grigio dall'esterno e fiocchi off in grandi, curvo e piuttosto piane 15,16. La corteccia e le foglie di questa pianta sono stati utilizzati nel sistema indigena di medicina per curare diverse malattie, la corteccia nel trattamento per angina (hritshool), espettorante, antidysentric, purgative, lassativo, leucoderma, anemia, iperidrosi, asthama, tumori e altre disturbi cardiovascolari 16,17 e le foglie come rimedio per il trattamento del dolore dell'orecchio 18. la corteccia possiede anche un bene antitumorale, antivirale e attività antimicrobica 19,20. Le piante hanno la capacità illimitata di sintetizzare metaboliti secondari come tannini, terpenoidi, alcaloidi, flavonoidi, glicosidi e fenoli che sono stati trovati ad avere proprietà antimicrobiche 11,21,22. Le foglie e la corteccia di Arjuna T. contengono glucosidi che hanno effetto protettivo cardio, flavonoidi che hanno antiossidante, anti-infiammatori, antimicrobico (luteolina), gli effetti di abbassamento anti-cancerose e lipidi, tannini responsabili astringente, la guarigione della ferita, antiossidante, anti cancro, anti virale e l'attività antimicrobica. Oltre a questi corteccia phytocompounds contiene anche triterpenoidi responsabili principalmente per protezione e antibatterico (acido arjunic, arjungenin e, arjunetin) cardio effetto 15,16,23. Una grande varietà di piante medicinali usate tradizionalmente non sono ancora stati sistematicamente studiati contro vari agenti patogeni microbici 24. La letteratura di ricerca rivela la conduzione di alcuni studi sulle attività antibatterica e antimicotica delle varie parti di questa pianta, come la corteccia 23.25,26. foglie, radici e 15,27,28 frutta. Tuttavia, gli studi antimicrobici contro gli agenti patogeni che causano le infezioni dell'orecchio sono carenti. Il presente studio è stato condotto per validare il potenziale antimicrobico di foglie T. arjuna e corteccia contro i patogeni orecchio batteriche e fungine isolati dai pazienti locali di Kurukshetra ed il loro confronto con orecchio localmente disponibile gocce con una vista di ricerca di un estratto di romanzo come rimedio per il trattamento delle infezioni dell'orecchio. MATERIALI E METODI La corteccia e le foglie di Arjuna Terminalia sono stati raccolti dagli alberi lungo le strade dell'Università di Kurukshetra, Haryana. L'identità tassonomica di questa pianta è stata confermata dal Dr. B. D. Vashishta di Botanica Dipartimento, Kurukshetra University, Kurukshetra. Estrazione di materiale vegetale I campioni sono stati accuratamente lavati sotto acqua corrente seguita da acqua e aria sterile distillata essiccata a temperatura ambiente (40 ° C) per 4-5 giorni e poi omogeneizzato a una polvere fine con una smerigliatrice mixer sterilizzazione e la conservazione in bottiglie a tenuta d'aria . Quattro differenti solventi cioè etanolo, metanolo, acetone e acquosa (caldo e freddo) sono stati utilizzati per l'estrazione. Una quantità di 10 g di corteccia omogeneizzato e foglie sono stati separatamente imbevuto in beute ogni containing100 ml di acetone, etanolo, metanolo (95) e acqua distillata sterile. Anche la stessa quantità (cioè 10 g) di corteccia omogeneizzato e foglie furono immerse separatamente in 100 ml di acqua distillata sterile calda in beute e lasciato riposare per 30 minuti a bagnomaria, con occasionale agitazione seguita mantenendo tutti i flaconi su shaker rotativo a 200 rpm per 24 h 29-31. Ogni preparazione è stata filtrata attraverso carta da filtro Whatman n ° 1 sterilizzato e infine concentrata a secco sotto vuoto a 40 ° C utilizzando rotaevaporator. L'estratto essiccato così ottenuto è stato sterilizzato overnight UV-irraggiamento e controllato per la sterilità su piastre agar nutritivo e conservato a 4 ° C in bottiglie sterili etichetta fino a quando utilizzare ulteriormente 14,32. Cinque batteri cioè Staphylococcus aureus (HM626197) (Gram-positivi), Acinetobacter sp. (HM626198), Proteus mirabilis (HM626199), Escherchia coli (HM626200), Pseudomonas aeruginosa (HM626201) (Gram-negativi) e uno lievito, Candida albicans utilizzati in questo studio, sono stati isolati da pazienti con infezione dell'orecchio dalle cliniche ORL locali di Kurukshetra. ceppi batterici sono stati identificati sulla base di colorazione, biochimici e molecolari (16S rRNA sequenziamento) 33 e lievito sulla base di colorazione, caratteristiche morfologiche e culturale 5,34,35. Gli isolati batterici sono stati subcoltura su agar nutriente e lievito per il malto di lieviti e agar incubate in aerobiosi a supporto 37C. The sono stati acquistati da Hi Media Laboratory Pvt. Ltd. Bombay, in India. Tre gocce per le orecchie comunemente prescritti da otorinolaringoiatra, due allopatica Ciplox (antibatterico), Istantanea (antimicotico), e una goccia orecchio a base di erbe Bilwa Tel (antimicrobico), utilizzato in questo studio, sono stati acquistati dal mercato locale di Kurukshetra. Screening per attività antimicrobica L'acetone, metanolo, etanolo, foglie Arjuna T. acquosa calda e fredda ed estratti di corteccia sono stati utilizzati per la valutazione delle attività antimicrobica con il metodo di agar ben 36,37. In questo metodo, puro isolato di ogni microbo stato subcoltura su piastre agar a 37 ° C per 24 h. Un piatto di ogni microorganismo è stata presa e un minimo di quattro colonie stati toccati con un'ansa sterile e trasferito in soluzione fisiologica (0.85) in condizioni asettiche. Densità di ciascuna sospensione batterica è stata regolata uguale a quella di 10 6 cfu / ml (standardizzato 0.5McFarland standard) e utilizzati come inoculo per dosaggi ben agar. Cento microlitri (volume 100 litri di ciascun estratto è stato spinto direttamente nei pozzetti (in triplicato) del inoculato piastre di agar per ogni organismo di prova. Le piastre sono state lasciato riposare per 1 ora per la diffusione dell'estratto in agar e incubate a 37 ° C per 24h. 32,39. sterile DMSO (20) è servito come controllo negativo e ciplox (per i batteri), candida (per i funghi) e Bilwa tel (antimicrobico) goccia orecchio servito come controllo positivo. l'attività antimicrobica, indicato da una inibizione zona che circonda il pozzo contenente l'estratto, è stato registrato se la zona di inibizione è stato maggiore di 8mm 40. gli esperimenti sono stati eseguiti in triplicato e sono stati calcolati i valori medi del diametro di zone di inibizione con deviazioni standard. Determinazione della concentrazione minima inibente (MIC ) MIC per ciascun organismo di prova è stato determinato seguendo la modifica agar metodo di diffusione bene. Un diluizioni seriali di ciascun estratto è stato preparato prima ricostituendo estratto secco (100 mg / ml) in 20 DMSO seguita mediante diluizione in acqua distillata sterile (1 : 1) per ottenere un intervallo di concentrazione decrescente di 50mg / ml a 0.39mg / ml. A 100 8mm), è stata registrata per ciascun organismo di prova 32, 37,41, 42. Tutti i dati sono stati presentati come media SD (deviazione standard). I risultati sono stati valutati statisticamente utilizzando Dennetts T-test. valore di P inferiore a 0,01 sono stati considerati significativi. L'attività antibatterica di corteccia arjuna T. e lascia estratti sulle piastre di agar diversi in differenti solventi. Dei dieci estratti screening per attività antifungina, nessuno dell'estratto mostrato la produzione di zona di inibizione contro la Candida albicans prive così l'attività antifungina. I controlli positivi prodotte zone di inibizione di dimensioni significativamente contro i batteri testati e lieviti, tuttavia, controllo negativo producono alcun effetto inibitorio osservabile contro qualsiasi dell'organismo di prova (Tabella 1). La lettura dei dati nella tabella 1 mostra che tutti i sei estratti solventi organici delle due foglie e corteccia possedevano attività antibatterica contro i quattro batteri patogeni, dei cinque patogeni testati. L'estratto di foglia acetonic è risultato essere più efficace contro Staphylococcus aureus (28 mm) (Figura 1), seguita da Proteus mirabilis (27,6 millimetri), Acinetobacter sp (16,6 millimetri) e Pseudomonas aeruginosa (16 mm). Le zone inibizione prodotte dal metanolo ed estratti etanolici contro S. aureus e P. mirabilis compresi tra 24,6 millimetri e 26,3 mm. S. aureus e P. mirabilis sono risultati patogeni più sensibili sopravvissuti fino 1,56 mg / ml e 3,12 mg / ml (Tabella 2), avendo così un MIC di 3,12 mg / ml e 6,25 mg / ml, rispettivamente. La zona di inibizione prodotta dagli estratti organici foglia contro P. aeruginosa e Acitenobacter sp. variava tra il 15 e 16,6 millimetri. P. aeruginosa e Acitenobacter sp. sono stati trovati per essere relativamente meno sensibili sopravvivevano fino a 25mg / ml (metanolici e etanoliche estratti) e 12.5mg / ml (estratto acetonic) avendo così una MIC di 50 mg / ml e 25 mg / ml, rispettivamente. Nessuna attività antibatterica è stata osservata in estratti acquosi e organici foglia contro E. coli. Tra gli estratti di corteccia testati, tutti i cinque estratti solventi (organici e acquosi) hanno mostrato attività antibatterica contro S. aureus con la massima zona di inibizione in estratto acquoso caldo (27,6 millimetri) seguita da estratto acquoso freddo (26,3 millimetri) (Figura 2), estratto di etanolo (26 millimetri), metanolo ed estratti di acetone (23mm). S. aureus è stato nuovamente risultato essere il patogeno più sensibile sopravvissuta fino concentrazione minima ie0.78 mg / ml in acqua calda, l'acqua fredda ed estratti di etanolo (Tabella 2), avendo così un MIC di 1,56 mg / ml seguito da metanolo e acetonic estrae 3mg / ml. Le zone di inibizione prodotti dai tre solventi organici contro Acitenobacter sp. variava tra il 16,3 millimetri e 17 mm. Acitenobacter sp. era relativamente meno sensibili quanto sopravvissuto fino 12,5 mg / ml, avendo così un MIC di 25 mg / ml. La zona di inibizione prodotta dai organici estratti di corteccia solvente contro P. mirabilis e Escherchia coli era quasi uguale e variava tra il 14,6 millimetri e 16,3 millimetri. P. mirabilis sopravvissuti fino a 12.5mg / ml (acetone) e 25mg / ml (metanolo ed etanolo), avendo così un MIC di 25 mg / ml e 50 mg / ml mentre E. coli è sopravvissuto fino 25mg / ml (etanolo e acetone ) e 12.5mg / ml (metanolo) aventi quindi un MIC di 50 mg / ml e 25 mg / ml, rispettivamente. estratti di corteccia, sia organici e acquosi, tuttavia, mancava attività antibatterica contro P. aeruginosa. Tutti i risultati ottenuti sono statisticamente significativi come mostrato (p 0,001) rispetto al controllo. Gli estratti organici di T. Arjuna foglie possedevano una buona attività contro i quattro agenti patogeni batterici dell'orecchio cioè Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Acitenobacter sp. e non ha alcuna attività contro E. coli. È interessante notare che l'estratto di corteccia ha anche mostrato una buona bioattività contro i quattro agenti patogeni batterici per le orecchie, tuttavia, P. aeruginosa non è stato trovato sensibile agli estratti di corteccia. L'attività antifungina contro C. albicans era totalmente assente nella foglia T. Arjuna e corteccia estratti sia organici e acquosi. In studio precedente, erano stati indicati gli estratti di radice di questa pianta di possedere attività contro Aspergillus niger e Candida albican 27. Le foglie aromatiche e estratti di corteccia di T. Arjuna mancata attività antifungina contro C. albicans e attività antibatterica contro i batteri testati, tranne una batterio Gram positivi, S. aureus che è stato trovato sensibile sia alle calde e fredde estratti di corteccia acquosi. Lo spettro limitato di attività antimicrobica negli estratti acquosi può essere dovuta a tre motivi: innanzitutto la polarità dei composti antibatterici renderli più facilmente estratti con solventi organici rispetto al estratto acquoso composto secondo attivo può essere presente in quantità insufficiente nell'estratto greggio mostra attività con la dose impiegata e in terzo luogo, se il principio attivo è presente in quantità elevate, ci potrebbero essere altri costituenti presenti nell'estratto esercitando effetti antagonistici dei composti bioattivi 43. dei tre estratti organici di foglie schermato, l'estratto ha acetonic stato trovato per avere una migliore attività antibatterica rispetto ai corrispondenti estratti etanolica e metanolici (Tabella 1) sostituendo così i risultati di lavoratori precedenti 11,37,44,45 che hanno valutato l'acetone come il migliore solvente. L'attività antibatterica esibita da T. Arjuna foglie ed estratti di corteccia contro i patogeni batterici orecchio potrebbe essere dovuto alla presenza di metaboliti secondari quali acido arjunic, arjungenin. arjunetin e luteolina, che sono stati segnalati per essere antimicrobico in natura 15,16,23. Questo studio rivela che sia le foglie e la corteccia estratti organici di Arjuna T. hanno ampio spettro di attività antibatterica contro gli agenti patogeni per le orecchie come visualizzato dalla formazione di zone di inibizione di entrambi i Gram positivi e Gram-negativi. È interessante notare che tutti gli estratti organici di questa pianta hanno mostrato un'attività molto più potente contro i batteri auricolari testati da quella goccia di serie a base di erbe orecchio (Bilwa tel) in tal modo avendo un grande potenziale per essere sviluppato come una goccia orecchio a base di erbe per il controllo delle infezioni dell'orecchio batteriche. I nostri risultati ci permettono di concludere che, tutti gli estratti testati T. arjuna (in una delle testate di preparazione-acetone, etanolo o metanolo) hanno mostrato una buona attività contro entrambi i patogeni Gram-orecchio positivi e gram negativi, l'inibizione di essere superiore in Gram batteri positivi rispetto alle bacteria. This Gram-negativi probabilmente spiega l'uso di questa pianta dalle popolazioni indigene contro un certo numero di infezioni da generazioni. A partire da ora, poco lavoro è stato fatto sulla attività antimicrobica e applicazioni medicinali plausibili dei composti fitochimici e le indagini, quindi, ampi sono necessari come ad esempio studi in vivo su questa pianta necessarie per determinare la tossicità dei principi attivi, i loro effetti collaterali, le proprietà farmacocinetiche di sfruttare i principi bioattivi, per utilità terapeutica nel trattamento delle infezioni dell'orecchio. Le attività antibatteriche può essere migliorata se i componenti attivi sono purificati e adeguato dosaggio determinati per una corretta amministrazione. Infine, la necessità del momento è lo sviluppo di un Fitocomposto efficace in un prodotto a base di erbe sfruttabili, che è priva di effetti collaterali e problemi resistenza ai farmaci. 1. Gates GA. Esame di trattamento otite media. Otolaryngol testa collo Surg. 1996114 (4): 525-30. 2. Roland PS, Stroman DW. Microbiologia di otite esterna acuta. Larygoscope. 2002112 (7 Pt 1): 166-77. 3. Rosenfeld RM, Brown L, Cannon RC, Dolor JR, Ganiats GT, Hannley M, et al. guida di pratica clinica: otite acuta externa. Americano Acad otorinolaringoiatria-Chirurgia Cervico Fondazione. 2006134 (4 Suppl): S4-S23. 4. Dhingra PL. Malattie di orecchio, naso e gola. 4 Ed °. Nuova Delhi: Reed Elsevier India. Private Limited 2007. 5. Aneja KR, Sharma C, infezione fungina Joshi R. dell'orecchio: Un problema comune nella parte nord-orientale di Haryana. 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Sede da Associao Brasileira de otorrinolaringología e Cirurgia Crvico Av viso. Indianpolia, 1287 04063-002 Così Paulo / SP Brasil Tel. (0xx11) 5053-7500 Fax: (0xx11) 5053-7512 revistaaborlccf. org. br
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